Иммунный блоттинг в диагностике ВИЧ

Интерфероны, природа. Способы получения и применения.

Интерферонотносится к важным защитным белкам иммунной системы. Открыт при изучении интерференции вирусов, т. е. явления, когда животные или культуры клеток, инфициро­ванные одним вирусом, становились нечувствительными к заражению другим вирусом. Оказалось, что интерференция обусловлена образующимся при этом белком, обладаю­щим защитным противовирусным свойством. Этот белок назвали интерфероном.

Интерферон представляет собой семейство белков-гликопротеидов, которые синтезируются клетками иммунной системы и соединительной ткани. В зависимости от того, какими клетками синтезируется интерферон, выделяют три типа: α, β и γ-интерфероны.

Альфа-интерферонвырабатывается лейкоцитами, и он получил название лейкоцитарного;бета-интерферонназывают фибробластным, поскольку он синтезируется фибробластами — клетками соединительной ткани, агамма-интерферон — иммунным, так как он вырабатывается активированными Т-лимфоцитами, макрофагами, естественными киллерами, т. е. иммунными клетками.

Интерферон синтезируется в организме постоянно, и его концентрация в крови де­ржится на уровне примерно 2 МЕ/мл (1 международная единица — ME — это количество интерферона, защищающее культуру клеток от 1 ЦПД50вируса). Выработка интерферона резко возрастает при инфицировании вирусами, а также при воздействии индукторов интерферона, например РНК, ДНК, сложных полимеров. Такие индукторы интерферона получили названиеинтерфероногенов.

Помимо противовирусного действия интерферон обладает противоопухолевой защитой, так как задерживает пролиферацию (размножение) опухолевых клеток, а также иммуномодулирующей активностью, стимулируя фагоцитоз, естественные киллеры, регулируя антителообразование В-клетками, активируя экспрессию главного комплекса гистосовместимости.

Механизм действияинтерферона сложен. Интерферон непосредственно на вирус вне клетки не действует, а связывается со специальными рецепторами клеток и оказывает влияние на процесс репродукции вируса внутри клетки на стадии синтеза белков.

Применение интерферона. Действие интерферона тем эффективнее, чем раньше он начинает синтезироваться или поступать в организм извне. Поэтому его используют с профилактической целью при многих вирусных инфекциях, например гриппе, а также с лечебной целью при хронических вирусных инфекциях, таких как парентеральные гепатиты (В, С, D), герпес, рассеянный склероз и др. Интерферон дает положительные результаты при лечении злокачественных опухолей и заболеваний, связанных с иммунодефицитами.

Интерфероны обладают видоспецифичностью, т. е. интерферон человека менее эффективен для животных и наоборот. Однако эта видоспецифичность относительна.

Получение интерферона. Получают интерферон двумя способами: а) путем инфицирования лейкоцитов или лимфоцитов кро­ви человека безопасным вирусом, в результате чего инфицированные клетки синтезируют интерферон, который затем выделяют и конструируют из него препараты интерферона; б) генно-инженерным способом — путем выращивания в производственных условиях рекомбинантных штаммов бактерий, способных продуцировать интерферон. Обычно используют рекомбинантные штаммы псевдомонад, кишечной палочки со встроенными в их ДНК генами интерферона. Интерферон, полученный генно-инженерным способом, носит название рекомбинантного. В нашей стране рекомбинантный интерферон получил официальное название «Реаферон». Производство этого препарата во многом эффективнее и дешевле, чем лейкоцитарного.

Рекомбинантный интерферон нашел широкое применение в медицине как профилактическое и лечебное средство при вирусных инфекциях, новообразованиях и при иммунодефицитах.

Иммунный блоттинг в диагностике ВИЧ

Основы иммунологии — Иммуноблотинг

Cмотрите так же…
Основы иммунологии
Предмет, цели и задачи иммунологии
Общая характеристика иммунной системы млекопитающих
Строение и характеристика центральных и периферических органов иммунной системы
Понятие об иммунитете. Естественный иммунитет. Активная и пассивная формы иммунитета.
Искусственный иммунитет и его роль в борьбе с инфекционными заболеваниями. Понятие о вакцинах и сыворотках, применяемых для профилактики инфекционных болезней
Конститутивные и индуцибельные защитные механизмы организма млекопитающих от инфекции.
Защитная функция кожи и слизистых оболочек млекопит-х.
Роль нормальной микрофлоры человека в защите от инфекции.
Развитие и характеристика фагоцитирующих клеток млекопитающих
Процесс фагоцитоза. Механизмы инактивации микроорганизмов фагоцитами.
Система комплемента, пути ее активации и механизм действия.
Общая характеристика иммунного ответа на тимусзависимые антигены, его этапы и конечный результат.
Развитие и характеристика антигенпредставляющих клеток, их локализация в организме
Процессинг антигена, его значение в развитии иммунного ответа
Т-лимфоциты, их развитие и локализация. Т-хелперы и их роль в развитии иммунного ответа на тимусзависимые антигены
В-лимфоциты, их развитие и локализация. Плазматические клетки и продукция антител
Иммунологическая память. Первичный и вторичный иммунный ответ
Характер взаимодействий антигенпредставляющих клеток
Понятие об антигенах. Общие свойства антигенов. Полные и неполные антигены.
Классификация антигенов по происхождению. Типы антигенной специфичности
Зависимость антигенных свойств от молекулярной структуры.
Классификация антигенов по происхождению. Типы антигенной специфичности
Функции Fаb- и Fс-частей молекулы иммуноглобулина
Генетические механизмы формирования специфичности иммуноглобулинов и переключения клеток на синтез иммуноглобулинов определенного класса
Паратоп и эпитоп. Характер взаимодействия антиген-антитело. Аффинитет и авидность
Агглютинация и преципитация. Реакции агглютинации и преципитации, применяемые в биологии и медицине
Иммуноэлектрофорез, его основные разновидности
Методы иммунофлюоресценции
Иммуноферментный анализ
Иммуноблотинг
реакции с участием комплимента.
Реакции нейтрализации, реакция опсонизации
Анафилаксия, анафилактический шок, сывороточная болезнь. Механизм возникновения гиперчувствительности немедленного типа. Аллергия и аллергены
Гиперчувствительность замедленного типа и механизмы ее развития
All Pages

Page 31 of 35

 Иммуноблотинг

Иммуноблоттинг применяют для выявления антител к отдельным антигенам или «узнавания» антигенов по известным сывороткам. Метод состоит из 3 этапов: разделения биологических макромолекул (например, вируса) на отдельные белки с помощью электрофореза в полиакриламидном геле; переноса разделенных белков из геля на твердую подложку (блот) путем наложения пластины полиакриламидного геля на активированную бумагу или нитроцеллюлозу (электроблоттанг); выявления на подложкеискомых белков с помощью прямой или непрямой иммуноферментной реакции. Как диагностический метод иммуноблоттинг используют при ВИЧ-инфекции. Диагностическую ценность имеет обнаружение антител к одному из белков внешней оболочки вируса.

Иммуноблоттинг

После разделения сложной смеси белков методом электрофореза в полиакриламидном или агарозном геле их можно перенести из геля на микропористую нитроцеллюлозную мембрану. Далее неспецифически связанные с мембраной антигены могут быть идентифицированы с помощью меченых антител. Данный метод получил широкое распространение. Например, он используется для идентификации компонентов нейрофиламентов, которые предварительно разделяют в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия (ДСН). Разумеется, если антиген необратимо денатурируется ДСН, то такая методика использоваться не может. Если белки антисывороткк разделить изоэлектрофокусированием, а затем перенести (это и называется блоттингом)на мембрану, то с помощью меченого антигена можно установить и так называемый спектротип антисыворотки, т.е. определить изотип антител, взаимодействующих с данным антигеном.

Иммуноблоттинг

Иммуноблоттинг выполняли в три основных этапа: 1) фракционирование образца (см.3.3.), 2) перенос фракций на фильтр (собственно блоттинг), 3) иммунное выявление антигенов на фильтре.

Перенос фракций из геля на фильтр

Белки переносили из геля на фильтр электрофоретическим пометоду Тоубина с модификациями. Использовали нитроцеллюлозные фильтры с диаметром пор 0,2 мкм. Перенос осуществляли в приборе для переноса (BIO-RAD, Швеция) (рис.3.1), следуя протоколу фирмы.

Прибор для переноса белков (BIO-RAD, Швеция).

Рис.3.1.

В состав буфера для переноса входили 0,025 М трис — HCl, рН 8,3, 0,192 М глицин, 20 % метанол. Готовили «сэндвич», состоящий из последовательно уложенных друг на друга 1 листа фильтрованной бумаги, нитроцеллюлозы, гель и 1 листа фильтрованной бумаги. Такой «сэндвич» плотно зажимали между двумя губчатыми прокладками и помещали в камеру для переноса. Перенос проводили при комнатной температуре в режиме стабилизации по напряжению (100 В) в течение 1,5-2 часов.

По окончании переноса фильтр подвергали иммунному окрашиванию.

Иммунное выявление антигенов на фильтре

Иммунное выявление антигенов на фильтре выполняли по методу Тоубина с модификациями. По окончании электропереноса фильтр промывали в РВS (50 мМ трис HCl, рН 7,5, содержащий 150 мМ NaCl) в течение 5 мин, а затем инкубировали в РВS, содержащем 0,05 % Твина — 20 и 2 % сухого обезжиренного молока в течение 1 часа. Эта стадия необходима для блокирования свободных участков мембраны и предотвращения последующей неспецефической сорбции антител на эти участки. Фильтр отмывали 5 минут в Т-РВS (РВS, содержащий 0,05 % Твина — 20), а затем инкубировали с первичными антителами, взятыми в соответствующих разведениях в Т-РВS (1:1000), в течение ночи при 4 С. Затем фильтр отмывали Т-РВS (3 раза по 10 минут) и инкубировали с биотинилированными антимышинными либо антикроличьими JgG, взятыми в разведении 1:1000 в Т-РВS, в течение 1 часа. От несвязавшихся иммуноглобулинов фильтр отмывали 3 раза по 10 минут в Т-РВS, а затем инкубировали с конъюгатом стрептавидин-пероксидаза хрена, взятым в разведении 1:1000 в Т-РВS, в течение 1 часа. По окончании инкубации фильтр отмывали в Т-РВS 5 раз (первые две отмывки были по 15 минут, а три последние по 5 минут).

Мониторинг иммобилизованных антигенов проводили с помощью окрашивания в 10 % растворе диаминобензидина в 0,1% Т-РВS, содержащим 3% Н2О2.

Активация нейтрофилов

Выделенные нейтрофилы ресуспендировали в Hepes/ глюкозном буфере (10 мМ HEPES, рН 7,5, содержащий 150 мМ NaCl, 5 мМ КОН, 1,2 мМ MgCl2, 1,3 мМ CaCl2, 5,5 мМ глюкозы) до концентрации 1-3107 клеток/мл. Клеточную суспензию делили на аликвоты по 500 мкл., которые либо помещали в ледяную баню (для исследования антигенов в покоящихся клетках) либо подвергали воздействию агента, стимулирующего секрецию. В последнем случае клетки преинкубировали в 4-форбол 12-миристат 13-ацетатом, взятым в концентрации 20 мг/мл при 37 С в течение 10 мин., затем активированные и покоящиеся нейтрофилы подвергали процедуре иммунопреципитации.

Иммунопреципитация

В экспериментах по иммунопреципитации покоящиеся и активированные нейтрофилы (107 клеток) лизировали в 500 мкл лизисного буфера (20 мМ Т рис — НСl, рН 7,2, 100 мМ КСl, 0,9 % Тритон Х-100, 10% глицерол, 2 мМ ФМСФ). Лизаты подвергали центрифугированию при 18000 д (20 мин; 4С) и отбирали супернатанты. Супернатанты (в составе которых имеются различные SNARE комплексы) подвергали иммунопреципитации. Антитела против VAMP-1, SNAP-25, SNAP-23 сорбировали на протеин А-агарозе (10-20 мкг антител на 100 мкл 20-%-ой протеин А-агарозы) 2 часа при 4 С. Полученный афинный сорбент отмывали от несвязавшихся антител лизисным буфером, после чего инкубировали с лизатом нейтрофилов в течение носи при 4С. По окончании инкубации агарозу осаждали и 3 раза промывали лизисным буфером, после чего добавляли 30 мкл буфера для приготовления образцов для электрофореза (62,5 мМ Т рис —НСl, рН 6,8, 100 мМ дитиотрейтол, 2% SDS, 10% глицерол и 0,1 %, бромфеноловый синий) 5 и иммуноблотингу с использованием антител против синтаксина 6, а также VAMP-1, SNAP-25 и SNAP-23 (для контроля связывания АТ носителя с соответствующими компонентами SNARE комплексов).

Иммуноблоттинг

Немаловажное свойство этой мембраны — возможность ее многократного использования. Нейлоновые мембраны Zeta-Probe эффективно связывают SDS-белки в отсутствие спирта, причем это связывание устойчиво к последующим обработкам

Низкомолекулярные белки также удерживаются эффективно. Благодаря высокой связывающей емкости — около 480 мкг белка на 1 см2 — мембраны Zeta-Probe позволяют обнаруживать следовые количества белка в анализируемых смесях.

После того как антиген оказывается иммобилизованным на мембране, оставшиеся центры связывания блокируют растворами желатина, либо бычьего сывороточного альбумина, либо обезжиренного молока.

Затем мембрану инкубируют в растворе поликлональных или моноклональных антител к исследуемому анти гену. После отмывки несвязавшихся антител мембрану инкубируют в растворе вторичных антител, которые представляют собой конъюгат ферментов щелочной фосфатазы (alkaline phosphatase, АР) или пероксидазы хрена (horseradish peroxidase, HRP) с антивидовыми антителами (козьи антитела к иммуноглобулинам кролика, мыши или человека) либо белками А (белок Staphylococcus aureus) или G (белок Streptococcus sp.), имеющими высокую аффинность к Fc-области иммуноглобулинов.

Детекцию образованных иммунных комплексов проводят химическим или хемилюминесцентным способом. Субстратами для химической реакции при использовании конъюгатов щелочной фосфатазы служат 5-бром-4-хлор-3-индолилфосфат (BCIP) или тетразолий голубой (NBT), а при использовании конъюгатов пероксидазы хрена — 4-хлор-1-нафтол и перекись водорода.

В результате ферментативных реакций на мембране образуется окрашенная полоса или пятно в месте локализации комплекса антиген-антитело.

Чувствительность данного метода составляет 100 пг белка при использовании конъюгатов АР и 100-500 пг при использовании конъюгатов HRP. Хемилюминесцентная детекция иммунных комплексов позволяет определять менее 5 пг антигена. Принцип этого метода заключается в том, что при реакции HRP с перекисью водорода и циклическим диацилгидразинлюминолом происходит эмиссия света длиной волны 428 нм, которая может быть зафиксирована на светочувствительной пленке.



Реакция иммуноблотинга (РИ) разработана на основе ИФА. Является самым специфичным и чувствительным методом иммунохимического анализа. Иммуноблотинг (от англ. blot – промокать, пятно) сочетает ИФА с электрофорезом. Применяется для выявления не комплексных антител к ВИЧ, а антитела к отдельным его структурным белкам (белки-р24, гликопротеины-gр120, gр 41 и др.). Относятся к экспертным (подтверждающим) реакциям диагностики ВИЧ-инфекции.

Реакция проводится в несколько этапов:

Вирус разрушают на компоненты — антигены (р24, gр120, gр 41 и др.), которые подвергаются электрофорезу в полиакриламидном геле, то есть разделению антигенов на фракции по молекулярной массе.

2. Гель покрывают нитроцеллюлозной мембраной и на неё при помощи электрофореза переносятся фракции антигенов. Нитроцеллюлоза ведёт себя подобно промокательной бумаге. Мембрану разрезают на полоски (стрипы). Фирмы выпускают такие полоски с «блотами» антигенов.

Ложноположительный иммуноблот

Найдено (70 сообщений)

СПИД
25 января 2012 г. / Виктория…

Спидофобам, научная стаття о ВЭБ, можно все симптомы на него списать, у меня даже иммунограмма похожая
http://novosti.mif-ua.com/archive/issue-994/article-1038/print.html открыть (еще 19 сообщений)Последние 5:

25 января 2012 г. / Андрей

… тему нет. Наоборот, антитела к другим инфекциям могут быть восприняты ИФА как антитела к ВИЧ, и, соответственно, результат анализа будет ложноположительный, поэтому и сдают иммуноблот.

СПИД
12 декабря 2011 г. / Анна / Москва

Добрый день, подскажите, может ли быть ложноположительный ИФА если есть миома матки, полипы, и поблема с почкой? И еще вопрос- Ифа может быть сомнительным? а платном медцентре… открыть

13 декабря 2011 г. / Erik Kivexa

Анна, здравствуйте. Как уже сказали, ложноположительный ИФА бывает по разным причинам и … он положительный, то нужно сделать проверочный иммуноблот. Он не может стоить 11 тысяч … Вам обратиться в ваш СПИД-центр и сделать иммуноблот там или сделать тест еще раз …

СПИД
6 декабря 2011 г. / таня

Пожалуйста, помогите мне! 3 недели назад у меня взяли кровь из вены на антитела. Через неделю я пришла забрать результат, а мне ответили, что анализ в работе! и сказали… открыть (еще 8 сообщений)Последние 5:

6 декабря 2011 г. / Аноним

Результат вполне может быть ложноположительный, в таких случаях сделают иммуноблот и по его результатам вынесут окончательный вердикт. А еще, вполне могли в лабе что то напутать, такое тоже бывает .

СПИД
6 ноября 2011 г. / Анастасия… / москва

здравствуйте.скажите пожалуйста может ли анализ на ВИЧ показывать несколько раз подрят (в разных клиниках) ложноположительный анализ? и вообще из-за чего показывает… открыть

6 ноября 2011 г. / Анастасия…

… .я писала что была донором.а что такое первичный ИФА тест?а может быть что ложноположительный анализ опять был и из-за этого отправили в СПИД-центр на перепроверку?и как между собой связаны иммуноблот и первичный ИФА тест?

6 ноября 2011 г. / Erik Kivexa

Анастасия, здравствуйте. Да, вполне может. Ложноположительный результат бывает из-за перекрестных реакций с белками со схожей структурой. Это ничего не значит, если иммуноблот отрицательный, значит ВИЧ в организме нет.

СПИД
25 августа 2011 г. / Сергей / Москва

Здравствуйте! Через какое время после опасного контакта анализ методом ПЦР будет максимально достоверен? Спасибо! открыть

25 августа 2011 г. / arduan

… . ПЦР с достаточно большой вероятностью может дать ложноположительный результат. По принятым в России правилам, результат … результат на более чувствительном тесте — иммуноблоте. Положительный иммуноблот, является основанием для постановки диагноза ВИЧ.

СПИД
11 августа 2011 г. / Аноним

Мой результат пришол, результат не говорят сказали идти к инфекционнисту типо нет имуноблота и все результаты там…Как понять? Зачем надо идти к инфекционнисту? открыть (еще 4 сообщения)Последние 5:

11 августа 2011 г. / Владимир…

… выделило достаточно денег на тесты
Б)у вас положительный(Ложноположительный, сомнительный) результат Тестирования на вич методом ИФА, … чтобы проверить(т.е. подтвердить,или опровергнуть) его, требуется иммуноблот,которого нет,по причине, описанной мною выше …

СПИД
8 июля 2011 г. / Иван

Доброго дня! Ерик можно узнать по подробнее о анализах на вич ? Каким образом выделяют вирус из крови и что такое антиген антитело? открыть (еще 1 сообщение)Последние 5:

9 июля 2011 г. / Erik Kivexa

Иван, иммуноблот не диагностический тест, а подтверждающий, для этих целей его и используют. Ложноположительный результат — следствие перекрестных реакций на исследуемые белки, причины для этого могут …

СПИД
14 апреля 2011 г. / В.К,

Здешним фобам посвящается: :) http://www.eurasiahealth.org/eng/forum/viewtopic.php?t=1139&sid=db3f74caba272252f66a14c4b3bd7810 Читайте и делайте выводы о том, как у нас работают лаборатории :) И о человеческом факторе… открыть (еще 19 сообщений)Последние 5:

15 апреля 2011 г. / Илья

Для умных — сомнительный=ложноположительный (при диагностике ВИЧ). Вы бы для начала разобрасиль, что такое иммуноблот и как он делается (суть самого процесса).

СПИД
28 декабря 2010 г. / Ирина / Ростов

Здравствуйте, я беременна (1-й триместр) 2 раза сдавала анализ на ВИЧ. 1-й раз — результат сомнительный, 2-й раз (через 3 недели) — результат снова сомнительный, ПЦР- отрицательный.… открыть

28 декабря 2010 г. / Erik Kivexa

Ирина, здравствуйте. Скорее всего, это именно ложноположительный ИФА на фоне беременности. Не вижу повода для беспокойства, особенно учитывая отсутствие рисков. Но иммуноблот хорошо бы сделать для надежности и для полного исключения ВИЧ.

Клиники где можно сдать анализ

Клиника в Люберцах

ул. Преображенская улица, 4
Люберцы
Время работы:
круглосуточно

или по телефону8 (495) 432-06-70

Клиника в Отрадном

ул. Пестеля, 11
Отрадное
Время работы:
круглосуточно

или по телефону8 (495) 432-06-70

Клиника в Митино

Ул. Митинская, 28к3
Митино
Время работы:
круглосуточно

или по телефону8 (495) 432-06-70

Клиника на Аэропорту

ул. Черняховского, 8
Аэропорт
Время работы:
с 9-00 до 21-00

или по телефону8 (495) 432-06-70

Клиника на Сухаревской

ул. Селиверстов переулок, 8
Сухаревская
Время работы:
круглосуточно

или по телефону8 (495) 432-06-70

Клиника в Медведково

ул. Полярная, 32
Медведково
Время работы:
круглосуточно

или по телефону8 (495) 432-06-70

Клиника на Проспекте Вернадского

ул. Проспект Вернадского, 37к1а
Проспект Вернадского
Время работы:
круглосуточно

или по телефону8 (495) 432-06-70

Клиника на Белорусской

ул. 1-я Тверская-Ямская, 29 (3 этаж)
Белорусская
Время работы:
с 9-00 до 21-00

или по телефону8 (495) 432-06-70

Клиника на Курской

ул. Земляной вал, 38/40, стр. 6
Курская
Время работы:
с 9-00 до 21-00

или по телефону8 (495) 432-06-70

Клиника на улице Академика Янгеля

ул. Россошанская, 4,к.1
Улица академика Янгеля
Время работы:
с 9-00 до 21-00

или по телефону8 (495) 432-06-70

Клиника на 1905 года

улица 1905 года, 21
Улица 1905 года
Время работы:
с 9-00 до 21-00

или по телефону8 (495) 432-06-70

Клиника на Новых Черемушках

ул. Гарибальди, 36
Новые Черёмушки
Время работы:
с 9-00 до 21-00

или по телефону8 (495) 432-06-70

Клиника в Марьино

ул. Новомарьинская, 32
Марьино
Время работы:
круглосуточно

или по телефону8 (495) 432-06-70

Клиника на Беляево

ул. Миклухо-Маклая, 43
Беляево
Время работы:
круглосуточно

или по телефону8 (495) 432-06-70

Клиника в Солнцево

ул. Главмосстроя, 7
мкр. Солнцево
Время работы:
круглосуточно

или по телефону8 (495) 432-06-70

Клиника на Авиамоторной

ул. Авиамоторная, 41 Б
Авиамоторная
Время работы:
круглосуточно

или по телефону8 (495) 432-06-70

Клиника на Таганской

ул. Нижняя Радищевская, 14/2
Таганская
Время работы:
с 9-00 до 21-00

или по телефону8 (495) 432-06-70

Звоните и записывайтесь на прием в любое время по телефону 8 (495) 432-06-70
или

Диагностика ВИЧ у новорожденных

Анализ на СПИД у ребенка раннего возраста проводят в том случае, если установлен контакт с ВИЧ-инфицированной матерью. Серологические реакции могут быть положительными в течение 1,5 лет. Антитела в сыворотке крови новорожденного обнаруживают с помощью реакций ИФА, РИФ и иммунного блоттинга.

В течение 9 месяцев жизни ребенка положительный результат появляется в связи с наличием в сыворотке крови антител матери. Антиген р24 имеет специфичность около 65%. В некоторых случаях не удается обнаружить антитела у больного ребенка, если у него диагностировано врожденное низкое содержание глобулинов в крови. Установленный отрицательный результат иммуноблота не является гарантией отсутствия инфекции.

Тестирование проводят в несколько этапов:

  • на 1-2 сутки после рождения;
  • в 1-2 месяца;
  • в полугодовалом возрасте.

Дальнейшее изучение антител проводят до тех пор, пока не будут получены 2 отрицательных результата иммуноблота. Установление диагноза СПИД у ребенка, рожденного от ВИЧ-инфицированной женщины, возможно на основании 2 положительных результатов реакции ПЦР. Передача новорожденному возбудителя ВИЧ-инфекции исключена, если женщина не кормит ребенка грудью.

Иммунный блоттинг иммуноблот, Western Blot, вестерн-блот

В этом красивом ученом названии «blot» переводится скорее всего как «клякса», а «western» — как « западная» отражает направление распространения этой «кляксы» по бумаге слева направо, то есть на географической карте это соответствует направлению с запада на восток.». Суть метода «иммунный блот» заключается в том, что иммуноферментную реакцию проводят не со смесью антигенов, а с антигенами ВИЧ, предварительно распределенными методом иммунофореза по фракциям, располагающимся согласно молекулярному весу по поверхности нитроцеллюлозной мембраны. В результате основные белки ВИЧ, носители антигенных детерминант, распределяются по поверхности в виде отдельных полос, которые и проявляются при проведении иммуноферментной реакции.

Иммуноблот включает в себя несколько стадий:

Иммуноблот что это Иммуноблот в диагностике инфекционных заболеваний

Опубликованно 17.09.2017 00:10

Что такое иммуноблот? Это распространенный метод лабораторной диагностики вирусных инфекций человека. Он является одним из наиболее точных и надежных способов обнаружить наличие ВИЧ.

Для надежности он даже больше, чем энзим-соединенный assay иммуносорбента (elisa). Результаты иммуноблот считается неопровержимой и окончательной.Общая информация

Иммуноблот – что это? Для того, чтобы признать человека ВИЧ, вы должны пройти лабораторный метод исследования сыворотки крови на наличие антител.

Методом Вестерн-блот разделы также называется Вестерн-блот (вестерн блот). Он используется для обнаружения вирусных инфекций человека, в качестве дополнительного экспертного метода. Это необходимо для подтверждения ИФА – лабораторное исследование, позволяющее определить в крови наличие антител к ВИЧ. Иммуноблот перепроверить положительный ИФА.

Он считается наиболее чувствительным, сложным и дорогим.

Цель

Что такое иммуноблот? Эта методика лабораторных исследований сыворотки крови на наличие антител к вирусу.

В ходе специальных исследований общий вирусных белков в геле и на нитроцеллюлозные мембраны.




Comments

(0 Comments)

Ваш e-mail не будет опубликован.

Закрыть