Ошибочные результаты анализов на сифилис. Ложноположительные и ложноотрицательные результаты

Кровь Оксана Егорьева 24.10.2019

Реакции иммунной системы организма при заражении сифилисом

Сифилис — это инфекционное заболевание, вызываемое бледной трепонемой (бактерией Treponema pallidum). Организм человека, заболевшего сифилисом, защищается от возбудителя заболевания с помощью механизмов иммунитета. Проникновение, длительное сохранение в организме (персистенция) и размножение возбудителя заболевания в организме хозяина приводят к выраженным изменениям со стороны иммунной системы.

После попадания бледных трепонем в организм и при их дальнейшем размножении, в организме больного человека происходят иммунные сдвиги. Механизм иммунного ответа при сифилисе исследован не полностью, однако имеются достаточно убедительные данные о том, что в этом процессе участвуют все звенья иммунной системы.

Активируются механизмы как врожденного неспецифического иммунитета, свойственного человеку как биологическуому виду, так и адаптивного, антиген-опосредованного иммунного ответа, вызванного контактом с антигеном. В иммунном ответе организма принимают участие как клеточные (макрофаги, Т-лимфоциты), так и гуморальные механизмы (синтез специфических иммуноглобулинов — антител).

Иммунную реакцию вызывают белки, входящие в состав структур бледной трепонемы; они являются чужеродными веществами для организма человека и относятся к антигенам. Все антигены трепонемы способны стимулировать организм больного вырабатывать антитела соответствующих классов. Вследствие этого, в сыворотке крови больных сифилисом отмечается множественность антител: протеиновых, комплементсвязывающих, полисахаридных реагинов, иммобилизинов, агглютининов.

Классы вырабатываемых антител меняются на разных этапах течения сифилиса — в различных стадиях болезни преобладают то одни, то другие антитела, относящиеся к разным классам иммуноглобулинов. Сила иммунного ответа и спектр антител, выявляемых на разных стадиях развития инфекции, зависит от особенностей организма у данного человека.

У больных вторичным и третичным сифилисом отмечаются признаки микробзависимой супрессии иммунитета.

Сифилис принадлежит к инфекциям, хроническое течение которых вступает в несоответствие с выраженным иммунным ответом на антигены возбудителя. Иными словами, «иммунитет» (т.е. резистентность к инфекции) и «иммунные сдвиги» при сифилисе не совпадают, а иногда и противоречат друг другу.

Во многих случаях иммунологический ответ не предотвращает поэтапного развития инфекции. Организм хозяина неспособен уничтожить сифилитическую инфекцию, что приводит к дальнейшей эволюции патологического процесса. Болезнь, начавшись с местного процесса, распространяется на весь организм и продолжается много лет.

Диагностика

Диагноз скрытого сифилиса устанавливается на основании комплексной оценки анамнеза, показателей клинико-серологического обследования, данных конфронтации. Помогают диагностике указания больного на бывшую случайную половую связь с незнакомым партнером, наличие в прошлом высыпаний, проведенное лечение гонореи и т. д. При осмотре больного могут выявляться рубцы на месте бывших высыпаний. При обследовании лиц, имевших толовой или тесный бытовой контакт с больным ранним скрытым сифилисом, могут быть обнаружены проявления заразной формы сифилиса.

При диагностике скрытого сифилиса необходимо у всех больных исследовать кровь комплексно — на МРП, РСК, РИФ, РИБТ.

«На современном уровне знаний недопустима постановка диагноза скрытого или неведомого сифилиса без подтверждения его положительными результатами РИБТ».

Если нет возможности провести исследование крови на РИБТ и РИФ, то диагноз скрытого сифилиса может быть поставлен на основании двукратного (интервалы между исследованиями должны быть не менее 2 недель) резкоположительного результата серологических реакций на сифилис с обязательным определением титра реагинов.

У больных ранним скрытым сифилисом РСК с двумя-тремя антигенами обычно бывают резко положительными в высоком титре (1:120 — 1:320 и выше). Однако в ряде случаев (в начальном периоде раннего скрытого сифилиса, при приеме антибиотиков и т.д.) титр реагинов бывает низким при положительных и даже слабоположительных серологических реакциях и в неполном комплексе. РИФ положительная практически у всех больных; РИБТ у многих больных может быть отрицательной. В начале пенициллинотерапии часто происходит реакция обострения Яриша-Герксгеймера (обострение симптомов заболевания на фоне пенициллинотерапии). Динамика негативации стандартных серологических реакций в процессе лечения относительно быстрая.

У больных поздним скрытым сифилисом РСК резкоположительные или положительные в низком титре (1:5 — 1:20). Однако в некоторых случаях наблюдаются больные с высоким титром реагинов (1:160 — 1:320 и выше). РИФ и РИБТ положительны почти во всех случаях (98 — 100%) позднего скрытого сифилиса. В начале лечения реакция Герксгеймера обычно не наблюдается. Негативация стандартных серологических реакций в процессе лечения очень медленная.

Затруднение диагностики скрытого сифилиса может быть связано с тем, что стандартные серологические реакции не во всех случаях позднего периода сифилиса бывают положительными. Известно, что и РИФ, и РИБТ не обладают 100%-ной чувствительностью.

Надо отметить, что результаты стандартных серологических реакций могут быть неспецифическими ложноположительными, то есть их позитивность связана не с сифилитической инфекцией, а с определенным состоянием организма или с другими заболеваниями. В одних случаях ложноположительные реакции обусловлены, по-видимому, наличием общих антигенов у сходных возбудителей и выработкой антител, сходных с таковыми при сифилисе, в других случаях — изменениями в липидном обмене и в глобулинах сыворотки крови. Технические погрешности при постановке реакций также могут привести к неспецифическим результатам реакции.

Что делать

Если у пациента действительно имеется сифилис, положительный ИФА обнаруживается абсолютно всегда, не заметить присутствия трепонем при таком исследовании невозможно. Не стоит отчаиваться, заболевание хорошо поддается лечению, особенно на начальных стадиях.

Что необходимо делать при положительных результатах теста:

по показаниям врача пройдите дополнительные обследования;
пройдите курс антибиотикотерапии по выбранной схеме;
направьте усилия на укрепление иммунитета;
сообщите о заболевании своему половому партнеру;
в дальнейшем регулярно проходите профилактическую диагностику до момента снятия с учета в диспансере (через 5 лет при отсутствии положительных результатов анализов).

Не нужно откладывать уход на больничный и бояться огласки результатов. Диагноз шифруется и остается в секрете, лишь при угрозе инфицирования других людей необходимо сообщить о проблеме родственникам и половому партнеру, чтобы они прошли требуемые обследования.

Суммарные антитела к возбудителю сифилиса суммарные антитела к Treponema pallidum, к бледной трепонеме, антитела к антигенам Treponema pallidum IgGIgM, Syphilis IgM IgG, Treponema pallidum Antibodies Total

Иммуноглобулины класса G синтезируются обычно на 4-й неделе после заражения в более высоких титрах, чем IgМ. Для них характерна длительная циркуляция в организме, они обнаруживаются даже после клинического выздоровления. Сифилитические антитела могут быть неспецифическими (реагины) и специфическими (противотрепонемными). Реагины направлены как против липидных антигенов самой трепонемы так и против аутоантигенов, которые образуются в результате разрушения собственных клеток организма. При различных патологических и физиологических состояниях уровень реагинов может повышаться, поэтому часто они могут быть причиной ложноположительных результатов в ходе серологических реакций на сифилис. Соответственно, специфические противотрепонемные антитела направлены только против Treponema pallidum.

Лабораторная диагностика сифилиса регламентирована приказом Министерства здравоохранения РФ № 87 от 26.03.2001 г. «О совершенствовании серологической диагностики сифилиса», в котором утверждены методические указания по постановке отборочных и диагностических тестов на сифилис. В серологической диагностике сифилиса, в связи с особенностями иммунного ответа на эту инфекцию, используют сочетание неспецифических (нетрепонемных) и специфических по отношению к антигенам возбудителя сифилиса Treponema pallidum (трепонемных) тестов.

Таким образом, последовательность обследования пациентов на сифилис представляется следующим образом:
— При первичном обследовании производится постановка отборочного (скринингового) теста, в частности RPR (неспецифический антифосфолипидный тест), современный аналог реакции Вассермана и в случае положительного результата – любого специфического подтверждающего трепонемного теста (анализ на сифилис РПГА или ИФА).
— Следующий RPR ставиться после окончания терапии и по понижению титра судят о эффективности терапии и динамике инфекционного процесса. Терапия считается эффективной при снижении титра в 4 и более раз в течение 1 года.
— По окончании этого срока производиться постановка специфического подтверждающего трепонемного теста (РПГА, ИФА). Необходимо учесть тот факт, что противотрепонемные антитела, а следовательно и положительный результат, сохраняются у пациента в течение ряда лет, или даже всю жизнь.

Из всех серологических методов диагностики сифилиса предпочтение отдается методу ИФА, так как он является наиболее чувствительным (свыше 95%) и специфичным (100%). В ходе этого метода определяются специфические (трепонемные) антитела класса IgM и IgG (общие) в крови. Антитела класса IgG появляются в острый период заболевания и могут сохраняться у вылечившихся пациентов пожизненно. В комплекс серологических реакций на сифилис в соответствии с приказом МЗ РФ, обязательно должна входить постановка специфического трепонемного теста (как вариант ИФА-тест). Этот анализ может использоваться как высокоэффективный отборочный (скрининговый) тест и как диагностический подтверждающий тест на сифилис. В конце 3-4 недели заболевания, после появления первичной сифиломы, специфический трепонемный тест становиться положительным — это соответствует первичному серопозитивному периоду сифилиса. При появлении первых клинических признаков заболевания, в том числе твердого шанкра, выявление суммарных антител (IgM и IgG) к антигенам Тгеропеmа pallidum может подтвердить диагноз сифилиса. Дополнительным исследованием является проведение нетрепонемного антикардиолипинового теста — RPR. Эти два исследования являются взаимодополняющими. При совместном использовании RPR и теста на определение суммарных антител к антигенам Treponema pallidum методом ИФА — наиболее эффективный вариант серологического исследования для подтверждения наличия или исключения сифилиса.

Очень часто задаются вопросы: Сдают ли анализ на сифилис при беременности? Где сдать анализы на сифилис? Можно ли сделать экспресс анализ на сифилис? Сколько стоит анализ на сифилис? Отвечаем: анализ на сифилис при беременности сдают по назначению врача. Сдать можно в любом партнерском медицинском центре, который вы выберите у нас на сайте. Вы можете быстро, в течение дня, получить достоверный результат на руки в случае отрицательного значения теста, если сдадите анализ на сифилис в процедурном кабинете лаборатории BION. Сдать кровь на сифилис можно и анонимно (в данном случае анализ крови на сифилис, а именно результат исследования выдаётся с Ф.И.О. как «АНОНИМНЫЙ»). Цена анализа крови на сифилис у LAB4U в среднем в два раза дешевле, чем по вашему региону.

Плюсы, минусы, основные понятия ИФА

Методика ИФА специфичная и чувствительная. У врача есть возможность сравнить число антител в различное время, отследить развитие патологии. Еще одно преимущество состоит в том, что ИФА делают в каждом медучреждении.

У метода есть несущественный минус, он состоит в том, что анализ выявляет иммунный ответ антител, а не возбудителя заболевания. Антителами называются специфические белки, а антигенами – высокомолекулярные вещества органического происхождения из измененных болезнью клеток. Иммунным комплексом называется комплекс антиген-антитело, который участвует в работе иммунной системы.

Правила получения анализа на сифилис

Различные методы диагностики демонстрируют различную чувствительность и специфичность в зависимости от формы и стадии сифилиса. Вероятность ошибочного диагноза возрастает, особенно в случаях латентного, скрытого, сочетанного течения заболевания.

Ложноотрицательные результаты серологических специфичес- ких реакций (РПГА), вызванные биологическими факторами, могут быть обусловлены конкуренцией между специфическими IgM и IgG за связывание с антигеном на поверхности эритроцитов, а также «феноменом прозоны».

В последнем случае агглютинация не происходит из-за гиперпродукции антител к бледной трепонеме, поскольку каждый антиген-рецептор на эритроцитах из-за избытка антител связан с одной молекулой агглютинина, что препятствует образованию «решетки».

Замена РПГА на TPPA, т.е. эритроцитов на синтетические частицы, видимо, исключит или минимизирует получении ложноотрицательных результатов.

Ранний сифилис

Для исследовательских манипуляций зачастую используют кровь из вены. При определенных ситуациях лаборант может взять нужный образец для диагностики из пальца, либо из спинного мозга.

Промежуток от момента сдачи до получения результатов может быть различным: от одного дня до двух недель. Все будет определяться видом тестирования.

Диагностика

Перед тем как начать лечить больного, врач для постановки верного диагноза и назначения эффективной терапии проводит осмотр пациента и сбор анамнестических данных, а также назначает проведение:

Микроскопического и бактериоскопического обследования мазка взятого с поверхности шанкра (материалом является тканевый экссудат) или биопсийного материала лимфатического узла (но только в первый месяц заболевания). Для лучшей информативности мазка поверхности язв и эрозий предварительно смазывают физраствором, проводят забор материала и готовят препарат для микроскопического исследования. Проводится окраска материала по Романовскому-Гимзе, бледная трепонема при этом приобретает розовый оттенок

Необходимо акцентировать внимание на том, что живые бледные трепонемы в неокрашенном мазке не выявляются под световым микроскопом. В таком случае оправданным считается использование темнопольной или фазоконтрасной микроскопии

Трепонема обладает способностью приводить к преломлению лучей света и выглядит как спиралевидная полоска белого цвета.
Серологических реакций, целью которых является диагностирование антител к возбудителю сифилиса в плазме крови. Чаще всего проводят реакцию Вассермана и реакцию быстрых плазменных реагентов. Данные исследования считаются обязательными и применяются даже при осуществлении медицинского осмотра с профилактической целью в поликлинических медицинских учреждениях.
Реакции иммунофлюоресценции, гемагглютинации, иммобилизации трепонем. Данные исследования отличаются чрезвычайно высоким уровнем чувствительности и точности. Позволяют выявить в крови человека антитела. Например, IgM свидетельствуют о наличии острого воспалительного процесса, IgG указывают на хроническое течение болезни.
Иммуноферментного анализа. Этот метод обследования, как и предыдущие, помогает диагностировать наличие антител к бледной трепонеме. После того как пройдет 14 дней в плазме крови начинают проявляться IgM и IgA, а через месяц — IgG (особенностью является то, что именно в этот период их количество находится на пике, с течением времени оно уменьшается).
ПЦР диагностики.

Способы проведения

ИФА может проводиться разными способами. В каждом конкретном случае подбирается наиболее подходящий вариант.

В первую очередь, существует разделение методов на:

Качественный. Выявляется наличие инфекции или вируса в организме пациента.
Количественный. Определяет концентрацию антител к патогенному агенту в организме человека, что указывает на стадию и интенсивность развития заболевания.

Также существует классификация способов проведения ИФА по принципу воспроизведения необходимой реакции.

Различают 3 варианта:

Прямой. Меченные антитела вводятся в предоставленные образцы крови.
Непрямой с антигенами. Предварительно производится размещение сорбированных антигенов в ячейки полистирольного планшета, предназначенного для проведения ИФА. Затем к ним добавляются антитела вирусов, что провоцирует образование иммунных комплексов, необходимых для дальнейшей оценки результатов.
Непрямой с антителами. Для венерических заболеваний часто используется именно этот способ. Он предполагает предварительное сорбирование антител, лишь затем на планшет добавляют антигены.

Правила забора материала

Для того чтобы сократить риски получения недостоверных результатов, необходимо правильно сдать кровь для анализа.

Перед прохождением ИФА нужно соблюдать некоторые ограничения:

избегать интенсивных физических и эмоциональных нагрузок;
отказаться от курения и приема алкоголя минимум за 1 — 3 дня;
на несколько дней нужно перейти на правильное питание;
женщинам желательно контролировать фазу менструального цикла, так как гормоны способны исказить результаты;
последний прием пищи должен быть за 8 — 10 часов до сдачи крови;
за 10 дней исключается прием лекарств, которые могут повлиять на результаты исследования.

Для ИФА берется венозная кровь из локтевой вены, сдавать ее нужно утром натощак. В целом применяются стандартные правила подготовки к забору венозной крови. В зависимости от того наличие какого заболевания тестируется, могут вноситься дополнительные требования к предварительной подготовке пациента.

Методика проведения

Инструкция по проведению ИФА достаточно проста:

У пациента берется кровь из вены.
Взятый материал проходит подготовку и разделяется на пробы на специальной мелкоячеистой палетке.
Проводится смешивание антигенов с антителами по выбранной методике.
Оценивается реакция. Пробы сравниваются с контрольными образцами, производится качественная и количественная оценка результатов.
Данные заносятся в специальную таблицу с приложением количественных показателей (суммарные антитела).
Лечащим врачом производится расшифровка результатов. При необходимости назначается соответствующее лечение.

После проведения исследований пациенту выдается документ с результатами. Он имеет вид таблицы с соответствующими обозначениями напротив каждого типа иммуноглобулина на пересечении с наименованиями инфекционных заболеваний.

Особенности исследования

В зависимости от того, какой анализ будет проводиться, будет колебаться его ценовая политика. Если речь идет о сдаче крови для обычного обследования в диспансере, то обычно цена является чисто символической – оплата самого шприца для забора биологического материала. Но стоимость подобного исследования в частных центрах, либо оценка состояния больного посредством инновационных техник, может оказаться на порядок дороже. Поэтому точно узнавать, сколько стоит манипуляция, лучше заблаговременно.

Для определения возбудителя, а также стадии развития поражения при реагиновом и трепонемном тесте все равно придется подождать. Считается, что выявление антител является эффективным только по прошествии хотя бы трех недель. В идеале следует выждать около пяти недель после незащищенного полового акта, а уже потом идти в больницу.

В противном случае добиться правдивой клинической картины. Но не все понимают, почему приходится ждать еще около месяца, перед тем как разобраться с правдой. Причина кроется в том, что сдача совпадает приблизительно с десятым днем после появления первого характерного признака патологии. Это сифилитическая язва, которая формируется в месте проникновения инфекции в организм.

На фоне этого некоторые потенциальные зараженные хотят пойти окольными путями, используя методики с припиской экспресс. Но до истечения указанных временных рамок проведения предварительной оценки закончится лишь пустой тратой денег.

Разобравшись с тем, сколько дней требуется выждать в карантинном режиме, человек должен также ознакомиться с алгоритмом забора биологического материала. Основным источником для мониторинга становятся крупные сосуды. Удобнее всего забирать кровь из большой вены в зоне локтевого сгиба.

Иногда на месте укола потом образуется синяк, либо в процессе сбора материала человек испытывает ощущение, похожее на жжение. Но подобные явления – вполне нормальная реакция организма на внешнее вмешательство.

Некоторых пострадавших беспокоит, покажет ли общий анализ крови наличие сифилисной инфекции. Но для тщательной проверки собранного из пальца биологического материала попросту окажется недостаточно. Из-за того что в пальце сосредоточены исключительно капилляры, доставить необходимый для оценки объем окажется проблематичным занятием.

Из-за этого медики предпочитают более крупные вены, что не исключает возможности взять анализ из пальца для скринингового обследования. Оно выступает в качестве вспомогательного инструмента для выявления динамики восстановления. Также такой подход может стать чем-то вроде пробной меры.

Если во время сдачи стандартного тестирования обнаружатся причины для беспокойства, то тогда уже делают обстоятельный анализ из локтевой вены.

Еще один пункт поможет избежать лишней пересдачи тем, кто готовится к диагностике неправильно. Согласно протоколу, потерпевший должен приходить на прием натощак. Это означает, что последний прием пищи следует проводить хотя бы за восемь часов до назначенного вмешательства.

При игнорировании этого принципа материал окажется непригодным. Порча образца происходит из-за попадания в биологическую жидкость растворенных жировых компонентов принятой пищи.

Чтобы не переделывать все заново из-за собственной невнимательности, подготовка должна проводиться особенно тщательно.